癣菌病诊断技术（1）

刘欣

王帆译，刘欣校，严禁转载
摘要：本文回顾了鉴别和分离小动物癣菌感染的常用诊断工具。伍德氏灯是一种筛查工具，可以辅助毛发镜检寻找真菌元素。这里重点讨论能确诊癣菌病的试验，包括毛发直接镜检发现癣菌孢子，真菌培养和皮肤活检。关于采样技术、步骤和实验结果的判读也有详细介绍。
正文：
文章目的是描述小动物癣菌病诊断试验的方法和判读。除了对皮肤活检样本的组织学检查外，重点是那些能在诊所内完成的试验。
临床适用范围
癣菌病是小动物最常感染的皮肤病。其重要性也由于是人畜共患皮肤病。简单总结需要进行真菌培养的情况，列表包括（但不限于）如下：
• 任何具有癣菌病临床症状的病例。癣菌侵入毛囊，并且导致脱毛，毛干易断，毛发受损，皮屑和结痂，色素沉着（特别是猫），甲沟炎，毛囊炎，不同程度的瘙痒和红斑。
• 患皮肤病的猫。猫的癣菌病比犬更常见。另外，猫的临床表现各不相同，可以能很典型，也可能很怪异。对于患皮肤病的猫，不管其毛发的长短，都建议进行真菌培养。
• 患皮肤病的幼犬和幼猫。癣菌病是幼龄动物常见的皮肤病，并且可能与其他疾病同时发生（例如：跳蚤，蠕形螨）（图1）。
•虚弱的动物患皮肤病，特别是停止自我梳毛的猫。接受化疗的病例，一定要小心监护继发性皮肤病的发展，包括癣菌病。
• 任何患未确诊的慢性病例。癣菌病可能会表现出多种临床症状和/或某种继发性疾病的并发症。
•所有转诊或可疑的病例。很常见的转诊或可疑病例，很可能是癣菌病的某种特有的潜在临床表现。
• 所有新生的幼猫，或是不管何种来源的猫和/或有或没有临床症状。作者认为这种诊断试验就像检查粪便样本中的寄生虫一样重要。如果猫有外出活动，那么真菌培养应该作为每年一次的常规体检项目，就像犬每年一次的心丝虫检测一样。
• 任何患有皮肤病，并且要定期美容和/或运输的动物。
• 经常去‘狗公园’的患有皮肤病的犬。‘狗公园’是宠物主人可以训练其宠物的封闭式区域，与其他犬有更直接的接触。
• 所有宠物主人患有皮肤病，并想知道是否是来源于宠物。
• 对所有参与“宠物治疗”或医院项目的动物，要进行每个季度一次的真菌培养。不要忘了医院的所有供血犬也要进行真菌培养。
•任何年龄的从育种场所获得的动物。

诊断试验和步骤
伍德氏灯
背景介绍：
伍德氏灯是一种手持灯，通过镍或钴玻璃滤光器发出紫外线长波。滤光器除了波长在320nm和400nm之间的光，不会透过其他波长的光。当从伍德氏灯射出的较短波长的光（340-400nm）被吸收，并且射出更长波长的光（可视光）时，就产生了荧光。用伍德氏灯诊断小动物癣菌病并没有很大帮助，因为这只是一个筛查工具。兽医临床中重要的犬小孢子菌，是唯一能发荧光的癣菌。另外，不是所有犬小孢子菌的菌株都会发光。

适用范围：
伍德氏灯检查是犬小孢子菌感染的癣菌病的筛查工具。识别毛发，用其进行培养和/或直接镜检很有帮助（见下文）。临床上，有荧光反应的地方是猫癣菌病最活跃的病灶。

步骤：
伍德氏灯检查步骤如下：
•伍德氏灯打开后要先预热5-10分钟再使用。这是因为灯的波长和强度是与温度有关的。
•关上屋内的灯或尽可能调暗，并且医生应该用几分钟的时间，使眼睛适应暗光条件。（医生和病畜都应该尽可能的舒适，因为检查过程需要至少3-5分钟。你不能对一个移动的目标进行充分的检查！）在适应光亮的期间，病灶区应该用光至少照射3-5分钟。为了得到最佳结果，光源应远离病灶几英寸照射。
•通常能在结痂下找到发光的毛发；轻轻的撕掉或去除结痂能帮助找到感染的毛发。
判读：
当判读伍德氏灯检查时，以下要牢记：
• 这只是一种筛查工具；阳性或阴性的结果不能确定或排除感染。
• 最常见的犬小孢子菌的阳性荧光颜色是苹果绿/黄绿色。但是，有些病例毛干可能是蓝绿色。作者在有油腻被毛的长毛猫身上见过。
• 因为局部用药能改变荧光反应，对可疑的毛发应该沿毛发生长方向拔除，在靠近身体的毛干处能检查到阳性荧光。
• 最常见的假阳性结果包括：蓝白色表皮鳞屑，油性皮脂溢的黄色区域，各种颜色的线头和线绳，皮肤由于局部用药产生的褪色珊瑚红，以及人造的地毯纤维发出的苹果绿。这些纤维最常来源于用地毯余料做成的猫爪板。
• 对于已经确诊癣菌病的病例，伍德氏灯可以有助于观察治疗效果。根据感染阶段，发光的毛发将表现出不同的样式（图2）。在感染的活跃期或早期，整个毛干都发光。感染恢复时，毛发更靠近末梢的部分发光。由此推测感染已经治愈，近端部分没有感染。在感染的末期，只有毛干的尖端发光。还有，在治疗期间发光的毛发数量会减少。

其他临床应用：
用于病例筛查的理由之一是选择毛发直接镜检。荧光不会被透明剂破坏，用伍德氏灯可以更快的找到载玻片上可疑的毛发（见下文）。
评论：
作者只推荐插电式灯，不推荐手提式电池供电的设备。

背景介绍：
此技术是用显微镜检查毛发上存在的真菌孢子（分生孢子）和菌丝。这项技术需要练习，时间效率或性价比并不那么高，除非你已经找到了犬小孢子菌感染的发光毛发。毛发外癣菌和毛发内癣菌感染很容易混淆。兽医临床的皮肤癣菌形成毛发外癣菌孢子（在毛发外形成分生孢子外壳且真菌在毛干内增殖）。相反，几种人的皮肤癣菌形成毛内癣菌感染（毛干内真菌增殖产生毛干内分生孢子）。作者将这项技术仅用于检查找到的发光毛发，并且推荐使用透明剂（表1）。这些试剂可以引起背景碎片膨胀变模糊；真菌孢子和毛发不会受影响，且在检查时增加折光度。可用的透明剂包括：10%-20%的氢氧化钾(KOH)，KOH混合剂和荧光增白剂或氯酚溶液。由于犬小孢子菌形成毛发外孢子，因此透明剂不是绝对必要的，可以使用矿物油，但是我发现很难用矿物油混悬剂评估，因为好像背景碎片更多，并且确诊率降低了。

应用范围：
这项技术指出当宠物医生发现发光的毛发时，将其拔下进行镜检。如果检查是阳性，就能确诊为癣菌病并开始治疗。这项技术的优势在于缩短诊断时间，并且可以让宠物医生在真菌培养期间就开始治疗。即使当已经发现孢子的时候，我也总是做真菌培养。

步骤：
检查技术如下
•将发光的毛发沿毛发生长的方向轻轻拔下。通常将结痂从皮肤上轻轻撕掉，会暴露出结痂下发光的毛发。
• 将发光的毛发放在载玻片上。通常会拔下许多毛发，有些发光而有些没有。如果你拔下了大量的毛发，用伍德氏灯找到发光的毛发。
• 加一到两滴透明剂，盖上盖玻片。KOH反应需要30分钟。将载玻片轻轻加热10-30秒可以加快反应过程。或者将载玻片加热并放在显微镜灯上5-10分钟。注意加热不要使液体达到沸腾。用氯酚溶液可以立刻观看，并且这种产品的好处是没有伪影。
• 载玻片应先在低倍镜下观看。先用4倍或10倍物镜。
•将载玻片放置显微镜台上。打开显微镜灯，关掉实验室光源，用伍德氏灯帮助找到载玻片上发光的毛发。移动载玻片将发光毛发移到视野下。如果将伍德氏灯放置显微镜台下或旁边，透过目镜你应该能看到发光的毛发。看上去像是绿蓝色的荧光棒。一但找到毛发，可已将显微镜灯光调暗进行常规检查。

判读：
如果检查结果是阳性，即可确诊癣菌，然后开始治疗。如果有一些可疑应该推迟治疗（至少推迟全身治疗），直到真菌培养确诊感染为止。
• 用低倍镜在载玻片上找更有优势，可以使你更容易找到感染的毛发。与正常的毛发相比，感染的毛发更宽，膨胀，朽木样、结构模糊，以及几乎丝状的外观。所看到的是大量的毛发外癣菌孢子和/或毛发上的真菌菌丝。毛根的检查通常会更有收获。这些毛发外观上有明显的扭曲（图3）。
• 用高倍镜观察大量的分生孢子和/或真菌菌丝。透明剂会腐蚀显微镜镜头，因此从低倍镜换到高倍镜时千万要小心（图4）。
• 孢子是透明无色的。有颜色的物质可能是黑素颗粒，花粉颗粒或是其他杂质。


图1：患癣菌病的幼猫
图2：伍德氏灯阳性毛发的荧光模式。从左到右：初期感染的特点是近端荧光。整个毛干有荧光是感染成熟期。随着治愈毛发近端荧光消失，仅在尖端有荧光。没有感染或已经治愈的毛发没有荧光。
图3：显微镜（100倍）下的毛发：两个正常的和一个感染的

图4：显微镜下被感染毛发的发外癣菌孢子。（400倍放大）

笑笑

中山

木分

好详细   老师辛苦了  

lyang_006

刘老师辛苦了

lijunhu

学习了，老师，辛苦了

王木子

老师幸苦了

大虫吃小虫

学习了。辛苦辛苦

侯占军

谢谢老师的分享

tyh0326

学习了，谢谢刘老师

lsf7810

谢谢老师的分享，我想提一点自己的看法，最后一张图是不是应该戴个手套！:lol