样本采集与制作——翻译和疑问

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压片采样

    压片法可以应用于溃疡或者表面有渗出的病变（图1-8）或者是外科手术以及尸检获得的组织样本（图1-9）。即使炎症是继发的，外表病变压片也通常只能看到炎性细胞，肿瘤细胞不会脱落到渗出物中或者溃疡肿块的压片中。如果可以的话，除了压片外，还应该对溃疡或渗出部位下面组织进行FNB采样。在未溃疡部位插针采样可以减少污染。渗出或溃疡压片最大的好处是可以鉴别细菌或者真菌是否存在。但是请记住细菌有可能只代表继发细菌感染。

    溃疡部位压片应在清理之前，压片之后应使用盐水泡过的医用海绵清理病变。

    对手术或尸检组织压片采样时，第一步应先切开组织获得一个新鲜切面（图1-9）。然后，用一个干净的吸水材料把切面上的血液和组织液吸收干净（图1-10）。过多的血液和组织液会阻止组织细胞附着在玻片上，造成采集细胞过少。而且，过多的组织液会妨碍细胞在玻片上自然干燥时展开成其正常大小和形态。当病变表面过多的血液和组织液被吸收掉之后，在干净玻片中间按压病变表面然后直接向上拿起（图1-11）。重复上面步骤几次，在玻片上获得多个压印。如果过多的血液被充分吸掉，组织就会粘住玻片，看起来像脱了一层皮在玻片上。正确方式制作的玻片上在按压位置会有轻微不透明区域，但是不应该有血液堆积区域（图1-12）。

   不需要涂抹，不要在玻片上滑动组织，这样会造成细胞破裂。可以话，应该多制作几个玻片，可以保留少数几个以防需要特殊染色。制作了足够压片之后，组织应该泡在适当比例的福尔马林里，如果需要的话，这样可以送检做组织病理检查。

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刮片
    刮片可以应用于外部病变和手术或者尸检获得的组织。一般说来，刮片比压片能得到更多的细胞，但是，和压片一样，如果在溃疡表面刮片，得到的大多数是表面污染物和炎性细胞。总的来说，在诊断肿瘤时，刮片没有FNB有价值。刮片更适用于干燥平整的表皮病变（这些病变不适合FNB或者压片）以及来自手术或者尸检的组织（图1-13）。两个适合刮片的例子是猫嗜酸性肉芽肿病变和皮肤廯菌病。刮片时刀片垂直于病变并向一个方向重复刮几次。当刮干燥不溃疡例如皮肤廯菌那样的病变时，应刮得足够深，直至有血清或者血液渗出。这些蛋白质和纤维含量丰富的液体会帮组将细胞（刮皮肤廯菌时的毛发）固定在玻片上，并防止他们在染色时被冲走。将采集到的样本转移到玻片上，可以用刀片轻轻地涂抹在玻片上，也可以用后面介绍的一种制片方法。

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棉签取样

    总的来说，通常在其他采样方法都不适用时才使用棉签取样，例如阴道，外耳，或者瘘管采样时。外耳道和瘘管用棉签采样时非常容易找到感染病原。取样时使用灭菌棉签，如果病变潮湿，不需要湿润棉签；然而，如果病变不是很湿，建议用生理盐水先浸湿棉签。湿棉签可以帮助减少在采样以及制片时一些细胞的干扰。采样时应避免使用润滑凝胶（例如KY胶），因为胶会包裹住样本，使细胞无法染色，制作的玻片也无法判读。采样结束后，应立即轻轻地在干净玻片上滚动棉签。很重要的是棉签不要在玻片上擦来擦去，这样会导致细胞破裂（图1-14）。

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玻片制作：硬组织抽吸玻片盖玻片抹片法（压片制片法）    当使用正确时，这一般是FNB或者硬组织刮片的最佳制片法。制片目的是制作薄薄的一层细胞，细胞也完全展开，而且没有破裂。FNB采集到的样本推出在干净玻片（样片）的一端（1.3cm左右）。另一个玻片（展片）垂直盖在样片上的样本上方（图1-15）。由于展片本身的重力作用，样本通常会自行下两个玻片中间平展开来。如果样本过厚或者有颗粒，无法平展，那么在展片上施加一个短暂的轻微的向下压力后立即释放压力。然后轻轻地将展片沿着下面样片长度地方向拉动，将样本展开（图1-16）。尽管名字叫压片制片，但是很重要的是在涂片时不要在展片上施加向下压力，因为这会导致大多数细胞破裂。

   如果操作正确，抹片后的样本类似“火焰”形状，而且没有延伸到玻片的边缘。这点非常重要，就像血涂片一样，通常是在样本边缘细胞才会充分展开易于判读。抹片如果超出玻片边缘就表明样本太厚而无法判读。并且，许多自动染色机不会将整个玻片染色，而是会在玻片两端留0.6-1.3cm左右的宽度不染色。这些部位的细胞不会被染色，因此无法判读。即使用浸泡染色法将整个玻片全部染色，在一些显微镜上也很可能看不到边缘的样本。

   当操作正确时，即使是细胞团，这个方法可以很好地展开细胞，因此细胞细节也可以看得很清楚易于判读。这种方法的主要缺点是，尤其是新手容易出现，过多细胞破裂。淋巴细胞特别脆弱，在制片时即使施加中等压力也非常容易破裂。

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血涂片法

    很多样本，尤其是淋巴结抽吸物，从针筒推出至玻片上时有足够的组织液、血液或者两者都有，那么可以像制作血涂片一样将样本涂匀展开（图1-17）。尤其时对易破细胞来说，这种方法可以减少细胞破裂，而且一般会制作出薄薄的一层平展开并且完整的细胞。

    和玻片盖玻片法一样，用针筒将样本推出至样片的一端。样片长度的一端放在样本上的样本前面。展片与样片成45度角，并向后移向抽吸物，直至进入抽吸物的1/3处。然后展片快速平滑地向前滑动，就像做血涂片一样。抹片应在距样片另一端大约1.3cm处呈羽毛状结束。如果样本一路抹到玻片边缘，那么应该重新制作玻片，并且将更少的样本转移到玻片上。

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“海星”制片法

    有些人采用另一种方法铺开抽吸物，就是用针尖将抽吸物沿着不同方向在玻片上拉动，制造一个海星形状（图1-18和图1-19）。这种方法不怎么容易损坏易破细胞，但是在细胞周围会残留厚厚的组织液。经常遇到的情况是，厚厚的组织液会阻止细胞完全展开妨碍观看细胞细节。通常会有一些可以接受的样本区域，但是，更偏向用玻片盖玻片法或者血涂片法制作一个高质量的玻片。

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制片小贴士

    不要让样本干燥或者凝固：如果在制片之前样本已经凝固或者干燥，细胞很可能不能充分展开且难以判读。而且，细胞经常会被扭曲，或者由于相互凝固在一起无法染好。在采用之前应将几个干净玻片放在容易拿到的位置，缩短采样和制片间隔时间。

    一个经常会犯的错误是将针头里的样本远距离喷洒在玻片上。这会导致在玻片上形成许多滴样本，非常像散弹发射（图1-20），带来的问题是这些小点在操作者还没来得及制片时就已经干燥了。当在显微镜下观看时，会发现一团团没有平展开来的细胞，难以看清细胞形态。当将样本移至玻片上时，针头边缘应尽可能近的靠近玻片，推出样本呈一滴。然后应立即用前面介绍的一种制片方法制作玻片。如果采集到足够多的样本，滴在多个玻片上，应在样本干燥之前快速将所有玻片制作完成。如果使用不抽吸法时，针筒预先吸入空气可以减少采样和制片时间，并且制片之前样本凝固的可能性。

    避免制作厚抹样：制片抹样太厚的话，细胞无法完全展开，影响判读。被过多血液污染的样本，或者从易脱落大量细胞的组织中采集的样本（例如淋巴结抽吸物），常导致抹样过厚。理想情况是只滴一小滴样本到玻片上（大约制作血涂片所需的血量）。如果滴过多的样本到一个玻片上，那么抹样通常会很厚。如果样本一直可以滑到玻片边缘，抹样也很可能会过厚。

    一般来说，用针筒推出到玻片上的样本量是可以控制的。但是如果太多样本滴到玻片上，利用血涂片法仍然可以得到很薄的抹样。展片向后滑动至刚刚触及样本，样本便会由于毛细管作用在展片上铺开，然后快速向前抹片。另一种方法是，像玻片盖玻片法一样将展片平放在样本上，然后拿起展片并放在另一个干净的玻片上，在它上面制作一个抹样。如果需要的话，这种方法可以重复多次，最终初始样片上的样本也已经被涂抹开来。利用这种方法可以从一大滴样本中获得多个薄薄的抹样。

admin

这么积极主动地与他人分享自己的翻译成果，这时我的脑海里只出现了四个字“功德无量”，同时这四个字也献给宠医帮的所有专家！
楼主的行为对我们是极大的鼓励和支持，也是对宠医帮“开放、专业和便捷”这一理念最好的诠释。
再次感谢，希望今后能不断地看到楼主的文章。

胡璠

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