【兽医肿瘤前沿】犬骨肉瘤的转移进展模式及其与临床结果的关系： ...

胡璠

犬骨肉瘤的转移进展模式及其与临床结果的关系：对83只犬的尸检研究

翻译：刘语涵

 

摘要

骨肉瘤是一种高度转移性的原发性骨肿瘤，可在宠物犬和人类中自然发生。最常见的转移部位(肺) 以外器官的转移模式尚不清楚，并且尚不清楚转移进展模式与患者特征之间是否存在特定关联。这项回顾性研究描述了83只接受标准化治疗和临床监测的犬在前瞻性临床试验中的尸检结果，以记录转移的模式，并将这些模式和其他患者和肿瘤特异性因素联系起来。共记录了20个不同的转移部位，其中肺是最常见的转移部位，其次是骨、肾、肝和心脏。根据转移模式，确定了两种不同的犬群。实验地点、试验组、性别、血清碱性磷酸酶( ALP )活性、肿瘤位置与临床结果无显著相关性。在10只( 10 / 83 ; 12 %)犬的剖检中发现了第二种癌症类型。这些数据展示了骨肉瘤肺外转移的广泛性，为临床监测该疾病提供了一个基准。此外，这项研究还深入了解了原发性肿瘤的转录特征，这些特征可能与骨肉瘤转移到特定器官和组织的倾向有关。

 

关键词 犬、转移瘤、骨肉瘤、转录谱

 

1 简介

骨肉瘤是大型犬中最常见的癌症之一，每年至少有10000例发生。相反，该病在人类中很少见，在美国每年诊断的儿童、青少年和青壮年病例不到1000例。骨肉瘤通常形成于四肢骨骼，在人类中最常见的是股骨远端和胫骨近端，在犬中最常见的是桡骨远端和肱骨近端。虽然使用局部治疗(如手术和放疗)可以直接控制原发肿瘤，但许多被诊断为骨肉瘤的患者，无论物种如何，都有很高的转移率。转移性骨肉瘤仍然是人类和犬死亡的主要原因。人类的 10 年生存率为 25%，而犬的 3 年生存率为 10%。

犬和人类骨肉瘤之间的临床、分子和生物学相似性使犬成为研究转移进展模式的绝佳模型。通常涉及体外/离体系统和/或小鼠模型的实验室实验通常无法复制与自然发生的人类恶性肿瘤相关的肿瘤-宿主相互作用和危险因素的复杂性。犬骨肉瘤的流行为这一限制提供了解决方案，犬的寿命相对较短，而完整的、活化的免疫系统使研究人员能够以生物学加速的速度研究人类疾病。 NCI 的比较肿瘤学计划利用犬科动物的这一独特方面，通过称为比较肿瘤学试验联盟 (COTC) 的全国兽医学校合作伙伴关系进行实验研究。 到目前为止，在骨肉瘤该项目由莫里斯动物基金会资助并通过 COTC 基础设施进行，已有 400 多只犬参加了三项以骨肉瘤为重点的临床试验，目标是寻找对犬类和人类都具有转化价值的有效治疗方法。

此外，将犬作为骨肉瘤自然发生的模型，可以更多地获得死后数据和样本。癌症患儿的尸检非常罕见，反映了美国尸检率的普遍下降。根据Sirki á等人的研究，美国的尸检率约为5 %，而其他研究尸检率更低。在大约10 % - 35 %的患者中发现生前与尸检结果之间的差异，这使得尸检对成功的癌症研究至关重要。大多数父母不知道尸检是一种可能，因为医生不愿意强加给有此决定的悲痛家庭，并且一般认为父母会拒绝这种选择。这阻碍了从原发肿瘤和转移部位提取高质量样本的研究潜力。然而，犬的尸检受到的伦理问题较少，因此宠物主人更容易接受。对于那些在兽医学术机构接受治疗的人来说尤其如此，该机构支持进行全面的尸检，以充分记录死亡时转移性疾病的程度。例如，2009 年，加州大学戴维斯分校兽医教学医院的尸检率为 21.4%，几乎是美国人类医院尸检率的四倍。这一百比例反映了本研究数据中临床试验( COTC021 / 022 )的尸检率，略高为25 %。

2 假设和研究目标

本次回顾性病例回顾的目的是描述转移进展的模式，这是通过对 83 只患有骨肉瘤并接受标准化治疗和临床监测的犬进行全面尸检所记录的。我们的假设是，转移进展模式与特定的临床特征相关，例如肿瘤位置、性别、试验地点、ALP 状态、无病间隔 (DFI) 或生存期。此外，我们研究了原发肿瘤的转录谱与转移模式之间的任何关联，以确定可能与特定器官或组织转移相关的任何生物学基础。

 

3 材料和方法

COTC021/22共有 324 只犬入选，其中83只犬犬 (25%) 在研究期间或结束研究后在安乐死或自然死亡后接受了尸检。十七家 COTC 机构进行了尸检收集，包括对非肿瘤和肿瘤组织进行肉眼和组织学检查，并鉴定转移部位。每个收集机构向COP提供尸检报告。对所有犬的医疗记录进行了回顾，并记录了(年龄,品种,性别,原发肿瘤位置,治疗前血清ALP状态, DFI和总生存期)的数据。

一名兽医病理学家( J.A.B . )和两名兽医肿瘤学家( A.K.L.和E . B .)对剖检报告进行了审查，以确保报告转移扩散和其他恶性肿瘤位置的一致性和准确性。在胸膜或纵隔等胸部软组织中发现的转移病灶被报告为发生在胸腔内，并与肺实质内发现的转移病灶分开考虑。在腹壁、大网膜、肠系膜和肠道浆膜表面内检测到的病变同样被归类为发生在腹腔内。膈肌被认为是一个单独的转移部位。当可以通过组织病理学确认淋巴结结构以及转移时，就报告了涉及淋巴结的病变。当在非常类似于淋巴结的部位检测到病变但由于缺乏可识别的淋巴组织而无法确认时，根据解剖位置将其记录为发生在胸腔或腹腔内。皮肤和/或皮下组织的病变一起记录。口腔粘膜/粘膜下病变被记录为发生在口腔内。心包和/或心脏结构（例如心房、心室游离壁或隔膜）的病变一起记录为发生在心脏中。脑膜和/或脑实质的损伤被一起记录为发生在大脑中。表 S1 提供了本研究中分析的所有犬的临床和转移部位分布数据的详细视图。

 

3.1 原发肿瘤的转录表达谱

如前所述，通过对来自该临床试验队列的原发性肿瘤进行批量 mRNA 测序来进行转录谱分析。所有具有本文所述尸检数据的犬都具有可用于分析的原发性骨肉瘤肿瘤 mRNAseq 数据。

 

4 核酸分离

使用 Qiagen Allprep DNA/RNA Mini Kit (Cat#80204) 在 RNAlater 中从犬冷冻肿瘤组织中分离 RNA。使用 Nanodrop 8000 (Thermofisher) 和 Agilent 4200 Tapestation 以及 RNA Screen Tape (Cat# 5067-5576) 和 RNA Screen Tape 样品缓冲液 (Cat#5067-5577) 评估总 RNA 质量和数量。所有送检mRNA 测序的样本的 RNA 完整性数 (RIN) >8，总 RNA 数量 >100 ng。

 

5 文库制备及m RNA测序

讲 100 ng 至 1 μg 之间的 RNA 作为 RNA 测序文库的记录。根据制造商的方案，使用 TruSeq Stranded mRNA(Illumina)  试剂盒生成文库。使用 2 150 个循环试剂盒在 NovaSeq S1 上合并文库并进行测序。 HiSeq 实时分析软件（RTA v.3.4.4）用于处理原始数据文件。 Illumina bcl2fastq2用于解复用并将二进制碱基检出和质量转换为 fastq 格式。样品的过滤读数为4400 - 6100万，超过 91% 的碱基高于 Q30 的质量得分。使用 Cutadapt 对样品的读数进行了接头和低质量碱基的修剪。使用带有两遍比对选项的 STAR 比对器（版本 2.7.0f）将修剪后的读数映射到 CanFam4 参考基因组 (GSD_1.0)23。 RSEM（版本 1.3.1）用于基于 CanFam4 GTF 文件的基因和转录本定量。所有样本的平均比对率为83%，唯一比对超过66%。有 13.13%–26.26% 未映射的读数。使用Picard 软件计算绘图统计数据。样品的核糖体碱基含量在 0.01% 到 0.76% 之间。编码碱基百分比在 58% 到 71% 之间。所有样本UTR碱基百分比为10 % ~ 16 %，mRNA碱基百分比为75 % ~ 82 %。文库复杂性是使用 Picard 的“MarkDuplicate”实用程序根据映射读取中的独特片段来衡量的。样本有 48%–78% 的非重复读数。此外，使用STAR/RSEM工具（版本1.3.1）对所有样本进行基因表达定量分析。

 

5.1 统计分析

为了评估不同的转移生长模式，使用 R 中的 cluster 包对所有已确诊转移的犬类患者的转移部位数据进行聚类分析。探索了三种不同的聚类技术：凝聚聚类 (AGNES)、分裂分析聚类 (DIANA) 和K 模式。每个聚类算法的输入是每个患者的转移部位分布之间的成对Jaccard距离。使用组内平方和度量对不同数量的组评估每种技术的聚类质量（图 S1A）。总体而言，在 2 个组处观察到拐点，表明数据中存在两种不同的转移生长模式。除了组内平方和分析之外，我们还使用 R 中的 ConsensusClusterPlus 包进行了共识分析，以评估每个算法发现的组的稳定性。通过在原始数据集的随机子采样版本上重复运行聚类（最大迭代次数：100，采样数据集百分比= 80％）来凭经验估计共识聚类累积分布函数（CDF）。使用每种聚类算法检查共识 CDF 和共识 CDF 下面积的相对变化表明存在 2-4 个聚类（见图 S1B）。最后，当直观地比较不同算法的结果时（见图 S2），我们观察到 K = 2 聚类与 K = 3 和 K = 4 聚类的聚类结果有更好的一致性。这为 K = 2 组的存在提供了进一步的支持。转移部位数据的最终聚类由 DIANA 算法生成。使用 R 中生存包中的 survfit() 实用函数来估计每个组的生存轨迹和置信区间。为了检查推断的组是否具有显着不同的生存率，应用了对数秩检验。使用 R 中 survminer 包中的 ggsurvplot() 实用函数绘制 Kaplan-Meier 生存曲线和置信区间。使用 STAR 和 RSEM 工具（版本 1.3.1）25 对来自患者原发性肿瘤的匹配批量 mRNAseq 数据进行预处理，以量化每个样本中每个基因的预期读取计数。然后，我们使用 EdgeR26 进行组特异性差异分析，使用匹配原发肿瘤样本中每个基因的预期读取计数作为输入。高正对数倍数变化意味着该基因在组 1 中相对于组 2 过度表达，而高负对数倍数变化则意味着相反的情况（表 S2）。根据edgeR估计的基因表达对数倍数变化，将基因按降序排列。然后将此排名列表馈送到 clusterProfiler 工具 (clusterProfiler)27，以识别每个组中富集的顶级标志路径（表 S3）。此包中的 GSEA 实用程序函数用于具有默认参数设置的分析。作为此分析的输入提供的排名列表由 RNASeq 分析的所有基因组成，但由于读取计数较低而被 EdgeR 分析过滤掉的基因除外。富集高等级基因（即具有高正标准化富集分数）的通路被解释为在组 1 中过度表达/上调，而富集低等级基因（即具有高负标准化富集分数）的通路被解释为过度表达/上调。解释为在组 2 中过度表达/上调。相应的 FDR 调整富集 p 值 <.05 的路径被解释为显着富集的路径。为了可视化，每个显着富集途径的前 10 个前沿基因的基因表达在热图中描绘（参见第 6 节）。用于生成本研究结果的所有代码均存放在 https://github.com/spatkar94/COTC02122_metastases。

 

6 结果

 

6.1 犬骨肉瘤转移灶表现

在本报告纳入的 83 只犬中，有 12 只犬没有骨肉瘤转移，71 只犬已确诊转移，覆盖 18 个不同部位。骨肉瘤最常见的转移部位是肺，>75% 的病例 (54/71) 证实有转移到该器官的微观证据。其中两例患有肥大性骨病。第二常见的是骨头，包括肋骨、椎骨、骨盆和其他长骨。第三、第四和第五最常见的位置分别是肾脏、肝脏和心脏。转移性病变的亚肉眼和 20 倍放大的代表性组织学图像如图 1 所示。

 

图 1 犬骨肉瘤转移灶在多种组织类型（左列）内由肿瘤细胞与类骨质（右列）组成的代表性图像。 (A，B) 肺部是骨肉瘤转移最常见的部位。这只犬出现了多个类骨质肿块（C、D）。截肢后，大约 40% 的犬在新骨部位出现骨肉瘤。这是我们研究中第二个最常受影响的位置。其他常见部位包括（E，F）肾脏、肝脏和（G，H）心脏。

 

此外，在83只犬中，有10只( 12 % )在剖检时发现了第二种癌症类型：3只血管肉瘤，1只转移性黑色素瘤，1只口腔黑色素瘤，1只口腔纤维肉瘤，1只甲状腺癌，1只淋巴瘤和血管肉瘤，1只肾上腺肉瘤和血管肉瘤，1只甲状腺癌和转移性软组织肉瘤。在这10只患有第二种癌症类型的犬中，有3只犬还患有转移性骨肉瘤(表1 )。

表1 83只患肢的家犬在经过统一治疗和临床监测后，进行了完整的剖检。

犬数量	83
治疗方式
标准治疗	42
标准治疗+雷帕霉素	41
中位年龄（Y，范围）	8.3（1.4-15.6）
中位体重（Kg，范围）	38.8（21.1-74）
性别
去势	54（65%）
绝育	28（34%）
雄性	0（0%）
雌性	1（1%）
ALP 状态
正常	64（77%）
升高	19（23%）
原发肿瘤部位
肱骨近端	20（24%）
非肱骨近端	63 (76%)
桡骨远端	32
胫骨远端	14
股骨远端	7
胫骨近端	2
尺骨	3
其他	5
中位数DFI (天,范围)	210（14-1091）
中位生存期(天,范围)	257（14-1091）

DFI：无疾病期

 

6.1 犬原发性骨肉瘤的转录聚类

对 71 只患有骨肉瘤转移的犬进行的聚类分析显示出两个聚类（图 2A）。组 1 (n = 13) 主要在骨中发生转移，而组 2 (n = 58) 主要在肺和其他部位发生转移（图 2A）。集群 2 的转移数量较多，平均每位患者有 3 个，而集群 1 的平均每位患者有 1 个。统计分析未显示两个组的总体生存率和 DFI 存在显着差异（图 2B、C）。此外，聚类与入组地点、试验组、ALP 状态和肿瘤位置（肱骨近端与非近端肱骨；卡方检验 p 值 >.05）之间没有显着关联。见图 S3A-D ；表S4)。

 

图 2 转移部位数据的聚类分析。 (A) 组内平方和作为组数函数的演变。聚类技术：AGNES（聚合嵌套聚类或自下而上的层次聚类）、DIANA（DIvisive ANAanalysis 聚类或自上而下的层次聚类）、K-means、K-modes。可视化每个组的热图。列描绘转移部位，行描绘患者。 Kaplan-Meier 生存图描绘了属于每个集群的患者的总体生存率（B）和无病间隔 (DFI)（C）。 p 值是根据对数秩检验估计的。

 

接下来，我们对属于每个组的患者的原发肿瘤样本进行差异表达和通路富集分析，以确定与每个组相关的关键癌症标志通路（表 S2 和 S3）。图 3A 描述了考虑用于富集分析的 MSigDB 数据库中的一组标志路径及其相应的富集分数。图 3B 描绘了驱动所观察到的所述途径富集的前 10 个前沿基因的表达热图。来自 71 名患者原发性肿瘤的批量 mRNASeq 数据显示，属于组 1 的患者的原发性肿瘤显着富集了干扰素 α 反应所涉及的通路（FDR 调整后的 p 值 <.05），而组 2 则显着富集了以下通路： G2M 检查点和 E2F 靶基因，除了炎症反应途径、KRAS 信号传导和肌生成的下调（调整后的 p 值 <.05；图 3A），这可能表明肿瘤细胞广泛适应的能力增强和/或早期准备在转移过程中进入新环境。

图 3 Hallmark 通路富集分析确定了属于每个组的患者原发性肿瘤中上调的独特通路组。

 

7 讨论

全面的尸检是记录死亡时转移性疾病程度的最明确方法，并产生重要的肿瘤和非肿瘤研究样本。在 COTC021/22 登记的 324 只犬中，83 只犬（25%）在安乐死或自然死亡后接受了尸检。当作者具体报告时，先前研究的尸检率差异很大。本文提供的数据与之前发表的研究结果一致，其中包括接受治疗的骨肉瘤犬的尸检结果。 尽管报道的治疗方案各不相同，但最近的报告包括对受影响肢体进行截肢或保肢手术，然后进行铂类治疗基于化疗的药物单独使用或与多柔比星联合使用。在一项对 48 只犬进行手术后接受单药辅助卡铂的研究中，对研究期间死亡的 34 只犬中的 31 只进行了尸检。27 只犬（87%）有肺转移（1 只来自转移性血管肉瘤），11 只（35%）犬有骨骼部位转移或骨中第二原发病变，1 只（3%）犬有肥厚性骨病。 10只（32%）犬有腹内转移（涉及肝、脾、肾和淋巴结），2只（6.5%）犬有皮下转移，4只（13%）犬没有转移。另一项对 32 只犬的研究中，24 只死于转移性骨肉瘤，1 只死于转移性血管肉瘤，1 只因骨科疾病被安乐死。 15 只犬有肺转移，3 只犬有肋骨转移，3 只犬有椎骨转移，1 只犬有局部骨肉瘤复发，4 只犬有多个部位转移，7 只犬在数据收集时没有复发。然而，值得注意的是，该研究中只有8只犬进行了尸检以确定死亡原因，而在其余的犬中，死亡原因是根据身体、临床病理和/或放射学检查结果推测的。最近一项纳入50只犬的前瞻性、随机评估卡铂辅助化疗与卡铂/多柔比星交替化疗的第三项研究报告了9只犬的尸检结果，但没有报告具体的尸检结果。

除骨肉瘤外，10 只犬还患上了第二种癌症（10/83；12%），其中血管肉瘤是最常见的肿瘤类型（5 只犬）。以前的骨肉瘤研究也在尸检过程中发现了血管肉瘤。携带骨肉瘤的犬中血管肉瘤的发病率是由于这些肿瘤类型还是由于共同的危险因素所致尚不清楚，但在临床管理犬骨肉瘤患者时应该考虑到这一点。另外，2只肺转移犬被诊断为肥大性骨病( HO )。HO是一种副肿瘤性疾病，其特征是疼痛的骨膜反应和新骨沿着长骨生长。尽管其发病机制尚不清楚，但最常见的是与胸腔内的占位性病变有关，包括转移性骨肉瘤。在本数据集中，共有54只犬被诊断为肺骨肉瘤转移，其中包括两只发生HO ( 2 / 54 ; 3 . 7 %)的犬。这种情况在之前的骨肉瘤试验中已经报道过，并且应该在转移性骨肉瘤管理的背景下考虑。

尽管我们的研究重点是犬骨肉瘤的独特转移模式，但没有转移的犬代表了重要的第三组。在接受尸检的 83 只试验犬中，有 12 只犬没有观察到转移。有趣的是，在有或没有发生转移的犬之间，总生存率没有显著差异。然而，12例非转移性骨肉瘤患者中的6例因合并疾病/并发症而退出研究。非骨肉瘤疾病的发展在老年患者中并不少见，但可以阻止他们继续研究，导致治疗干预减少。复杂疾病的其他全身影响可能根据疾病类型和严重程度而有很大差异。在一些患者中，由于严重的非骨肉瘤疾病而进行安乐死，可能会阻止随着时间的推移而发生 的转移进展。为了更好地理解衰老相关疾病在荷瘤患者中的作用，还需要做更多的工作。

人们普遍认为，转移是患有骨肉瘤的犬和人类的生命限制因素，并且是这两个物种中最重要的预后因素，特别是在初次诊断时。然而，人们对骨肉瘤之间的关联知之甚少。转移的具体模式/程度和治疗后的存活率，以及是否存在与原发肿瘤特征相关的特定转移模式，例如，附肢骨骼内的位置。尽管在 DFI 或生存率方面没有显着差异，但未发生肺转移且转移部位总数较低的犬群体表明这些患者的进展模式与其余犬不同。如果没有在肺部等关键器官中发生转移，这些犬的整体寿命仍然有可能更长。然而，对于宠物犬，我们必须承认安乐死是最常见的死亡原因，并且通常反映了主人的意愿，而不是疾病的程度。

对两组犬的原发肿瘤的差异基因表达和通路富集分析发现了支持生物学的证据，有助于解释不同组织和器官的转移向性差异。例如，组 1 犬的原发性肿瘤显示干扰素 α 反应上调，而组 2 犬则表现出多种骨肉瘤相关基因（例如 MYC 以及 E2F 靶基因）的过度表达。 这可能支持组2的原发性肿瘤上调了支持稳健和多部位转移行为的转录程序。 转移进展依赖于细胞前往远处部位并在远处生存的能力，通常具有完全不同的微环境和显着的代谢、转录和免疫压力。这些结果与最近对人类骨肉瘤的研究一致，证明了MYC激活在骨肉瘤中的负面影响及其作为潜在预后因素的价值。

这两个聚类都表明了宿主免疫反应的存在，通过上调参与标志性免疫途径的基因。在组1中，顶端富集的通路与干扰素α ( Interferon alpha，IFN-α )应答相关，IFN - α是经典的与病毒感染相关的I型干扰素应答的组成部分。I型干扰素是天然免疫系统的重要组成部分，直接调节> 100个下游基因的转录。鉴于组 1 中的犬总体上转移灶较少，特别是明显缺乏肺转移灶，这种类型的免疫反应途径可能在某种程度上保护某些组织或器官作为潜在转移定植的部位。然而，这纯粹是一个观察结果，需要在实验环境中进行验证，并对转移性病变本身以及骨肉瘤犬的肿瘤邻近组织和非肿瘤组织内的转录谱进行额外分析。这些分析正在我们的实验室进行。

参与同种异体移植排斥的基因包括 Cluster 2 中富集程度最高的免疫途径，其中包括 NK 和 T 细胞特异性标记基因，如 CD96、CD8A 和 GZMB，以及参与促炎性免疫反应的基因，如 IL2R 和 IL18 。这些结果与之前一项针对犬骨肉瘤的小型研究一致，该研究确定了许多代表效应/细胞毒性 T 细胞反应的免疫反应基因集，以及 CD3+ T 细胞浸润和共抑制性免疫检查点表达，与患者较长的无病间期和良好的预后相关。

人们普遍认为，转移进展的生物学过程和转移到特定位置的倾向是复杂的，知之甚少，并且可能受到原发肿瘤特征、转移起始细胞和肿瘤周微环境( TME )的抑制或许可效应的综合影响。对配对的原发肿瘤和转移灶进行单核测序，以及对两个位置的TME进行比较评估，将更深入地了解影响这些不同模式和结果的因素。此外，还需要评估原发灶和转移灶的突变情况，以确定可能代表药物靶点的疾病的潜在驱动因素；这项工作正在我们的实验室和其他实验室进行。

这项工作的缺点包括潜在的观察偏差，因为尸检时疾病检测的程度可能反映了在各个 COTC 机构进行尸检的兽医学生/实习生和/或病理学家的不同专业知识。然而，我们没有检测到登记位置和转移部位分布之间的任何关联。此外，一些患者可能在试验完成后接受了进一步的治疗，这可能会影响我们的临床结果和转移簇指定的关联。临床检测到转移和生存之间的时间差异很大，并且取决于所有者在这种情况下寻求治疗的意愿。一项对患有Ⅲ期疾病的犬的研究发现，未接受任何治疗的犬的中位生存时间为49 - 57天。然而，一些业主可能会选择对骨肉瘤荷瘤犬进行额外的治疗，这些转移可能会影响总体生存率。例如，在一项研究中，接受挽救性细胞毒性治疗的犬从检测到肉眼转移到死亡的中位生存时间为147天。一份相关研究发现，接受某种形式的定向治疗的转移瘤犬的中位生存时间为76天，范围为0-1583天，并且在骨转移而不是软组织转移的犬中具有生存优势。

 

8 结论

这是迄今为止对接受统一护理治疗标准和标准化监测的犬进行的最全面的尸检研究，代表了护理骨肉瘤犬的兽医的基准研究。此外，这些数据强调了尽管积极治疗但仍发生转移进展的复杂性和广泛性，为犬作为人类骨肉瘤唯一自然发生的疾病模型增加了价值，并为研究针对这一方面的新策略提供了试验场。这种病。正在进行其他工作以确定犬原发性肿瘤和转移瘤的分子和基因组特征，以加深我们对骨肉瘤生物学的理解并发现新的药物靶点和途径。

 

致谢

RNA 测序和初始数据分析在弗雷德里克国家癌症研究实验室 (FNLCR) 进行，该实验室位于 NIH/NCI/癌症研究测序中心，Frederick, MD 21701。作者衷心感谢 NCI 比较肿瘤学的所有参与成员试验联盟为收集尸检数据做出的贡献使本出版物得以出版。

 

资金信息

这项工作得到了 NIH 国家癌症研究所校内计划 (Z01-BC006161) 的支持。本出版物的内容不一定反映卫生与公众服务部的观点或政策，提及商品名称、商业产品或组织也不意味着美国政府的认可。资助者在研究设计、数据收集和分析、发表决定或手稿准备中没有任何作用。

 

利益冲突声明

作者宣称没有利益冲突

 

数据可用性声明

支持本研究结果的数据可根据合理要求从通讯作者处获得。

杨先生

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