病理样本的送检,不是简单的将组织丢进固定液,送检至专业的机构就能有很好的结果。更多时候,病理送检的准确性与否,涉及到采样部位和采样方式的选择,样本的固定,病史资料等的详细填写以及后续跟病理学家的沟通。下面的文章会详细描述,如何更好地去使用活检这一技术和更好地送检病理样本。 1.样本收集 活检送检的每个步骤都很重要,关系到诊断的准确性。提供病史和病例信息——病理医生和临床医生沟通的桥梁。 1.1位置的选择 对于一个单个的小病灶,位置的选择直截了当(图1),但对于弥散性的病灶,或者病灶较大(图2),位置的选择非常重要,因为采样能够获得诊断性和无诊断性的样本。弥散性的皮肤病例中,选择几个位置的样本进行采样,可以获得疾病的范围。需要避开坏死,溃疡和继发感染的区域,因为这会掩盖了原发的疾病(图3)。对于难以切除的较大肿物,建议多个部位活检,包括外观明显不同的各个区域。 图1:单个病灶,一只梗犬鼻子上的病毒性乳头状瘤。一个简单的切除活检能够得到诊断和治疗的效果。
图2:脾脏远端的团块,需要对外观不同的各个部位都进行采样,才能完整地评估整个病灶。 图3:溃疡性皮肤病变(猫原位鳞状细胞癌)。相比于中央溃疡的区域,切除活检或者取周围病灶能够得到更好的诊断。 1.2大小 活检的类型有很多种,包括针芯活检,punch活检,切开活检,切除活检,内窥镜活检和全层活检(图4-7)。样本越大,得到准确诊断的可能性越高(图8)。 图4:皮肤团块针芯活检示意图,取病灶的一小部分样本。e=表皮,d=真皮,s=皮下组织。 图5:Punch活检示意图。活检器放置于病灶上,往一个方向旋转进病灶,但要避免过度用力。活检出一个圆柱体的组织。。e=表皮,d=真皮,s=皮下组织。 图6:皮肤团块切开活检的示意图,取的样本比针芯活检大,但小于切除活检的样本。。e=表皮,d=真皮,s=皮下组织。 图7:切除活检的示意图,移除整个病灶,提供(1)完整的,有代表性的样本(2)达到准确诊断的最好方式(3)可能达到治愈的作用。。e=表皮,d=真皮,s=皮下组织。 图8:活检样本的大小与具有诊断性意义样本可能性之间的图表。送检样本越大,样本更有可能代表整个病灶,获得诊断。 如果可以,采集周围外观表现正常的组织,能够帮助评估病灶,包括反应性组织的化脓性变化,良性肿瘤中边界良好的边缘或恶性肿瘤的侵袭性生长(图9-12)。 图9:外周成熟肉芽组织的显微图片,病灶和周围结缔组织混合在一起,一个帮助区分反应性病灶和间质肿瘤的特征。 图10:图9中肉芽组织中央的显微图片。如果没有评估病灶的边缘,这些有丝分裂活跃、不成熟的间质细胞很容易被误认为是恶性间质肿瘤。 图11:良性肿瘤(肛周腺瘤)平滑的边缘。样本中包括了肿瘤(左侧)和相邻带有毛发的皮肤。 图12:恶性肿瘤不规则边缘的显微照片。肿瘤(左侧)侵袭至相邻的纤维脂肪组织(右侧)。肿瘤组织周围包裹着成纤维反应(粘连形成)。 尽量小心处理样本,避免伪像。小的样本特别容易产生组织凝集和挤压伪像。电刀和激光会使组织凝集,产生无定形的残留物。对于较大的组织,可能只有边缘受影响(图13),中央仍有可供评估的组织但是对于较小的组织,可能会影响到整个样本,而使得样本出现无诊断性结果(图14-15)。 图13:口腔粘膜活检的显微照片,组织边缘凝固(右下角),使用电刀或激光导致的伪像,其特征是出现不定形的组织和细节的丢失。如果样本相对较大,则只影响到边缘,样本仍具诊断性(该病例是色素很少的口腔黑色素瘤。) 图14:广泛凝固的样本显微照片,样本细节消失(使用电刀或激光导致的伪像),导致组织无法辨认。 图15:来源于图14中的同个组织,没有凝固的显微照片。样本显示在凝固前,可能是纤维性齿龈瘤。 为了避免挤压伪像,使用锋利的刀片,并且温柔地对待样本,避免使用手术钳。使用新的活检打孔器,确保有锋利的刀头。淋巴细胞非常容易破裂(图16-17).如果怀疑淋巴瘤,取样和送检都应该十分小心。手术钳挤压或压碎样本,会导致组织破坏,细胞破裂(图18-22)。 图16:淋巴组织的显微照片,采样过程中由于挤压导致的伪像。细胞破裂,出现串流样染色质(蓝色的条带),妨碍了细胞的鉴别。 图17:图16中同个淋巴结的显微照片,没有挤压伪像。淋巴滤泡(左)中和副皮质区域(右)均完整,可辨别。 图18:钳夹导致组织破坏的显微照片,出现矩形的空间,很大程度妨碍了组织的辨别和组织学评估。 图19:图18同个组织样本的显微照片,没有出现钳夹的伪像。可见反应性纤维组织侵袭纤维血管组织和骨骼肌。右下角可见唾液腺组织。 图20:被镊子破坏的组织显微照片,导致两个部位的组织出现压缩。 图21:图20中被压缩组织的高倍镜显微照片,提示挤压伪像由镊子导致。细胞破裂,导致串流样染色质,妨碍细胞的辨别。 图21:图20中被压缩组织的高倍镜显微照片,提示挤压伪像由镊子导致。细胞破裂,导致串流样染色质,妨碍细胞的辨别。
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