【兽医肿瘤前沿】65例犬大颗粒细胞淋巴瘤（2005-2023年） ...

胡璠

65例犬大颗粒细胞淋巴瘤（2005-2023年）

翻译：徐晋

 

摘要

大颗粒细胞淋巴瘤(LGLL)是一种罕见的犬淋巴瘤。关于表现、治疗反应和结果的信息有限。这项单中心、回顾性研究的目的是描述LGLL犬的临床表现、生物学行为、结果和预后因素。还进行了细胞学复查。共纳入65只犬。最常见的犬种是拉布拉多犬(29.2%)，最常见的症状是嗜睡(60.0%)和食欲减退(55.4%)。最常见的原发解剖部位为肝脾(32.8%)和胃肠道(20.7%)。20只(30.8%)犬出现外周血或骨髓受累。32只犬接受最大耐受剂量化疗(MTDC)， 74.1%的犬有反应。≥7岁的犬以及诊断时有中性粒细胞减少或血小板减少的犬对治疗产生反应的可能性降低。MTDC治疗犬的中位无进展时间(PFI)为17 d (0-481 d)，中位总生存时间(OST)为28 d (3-421 d)， 6个月和1年生存率分别为9.4%和3.1%。多因素分析显示，单核细胞增多和外周血受累与较短的PFI和OST显著相关。长期生存(≥100天)与细胞学上中等大小的淋巴细胞显著相关。LGLL犬对化疗的反应率中等，但总生存期较差。需要更多的研究来进一步评估预后因素并指导最佳治疗建议。

 

1 简介 

犬淋巴瘤是一种异质性疾病，可呈现不同的临床表现、形态和行为。根据组织病理学和免疫组织化学(IHC)，采用世界卫生组织(WHO)或更新的Kiel系统进行淋巴瘤亚型分类，有助于治疗选择和预后判断。免疫表型在很大程度上取决于解剖形态，B细胞淋巴瘤多见于多中心型，T细胞亚型多见于胃肠道、纵隔和趋上皮皮肤型。由于组织病理学和IHC需要有创操作，如淋巴结切除或活检，因此细胞病理学被认为是诊断淋巴瘤的一种合法且耗时较少的诊断技术，但其局限性包括无法评估淋巴结结构或准确的有丝分裂指数(MI)。

大颗粒淋巴细胞(LGLs)是一种中间到大的淋巴细胞亚型，含有特征性的嗜天青胞质颗粒；它们代表细胞毒性T细胞(T-LGL)或自然杀伤细胞(NK-LGL)。犬的颗粒淋巴细胞瘤最常以慢性淋巴细胞白血病(CLL)的形式出现。44%-73%的犬CLL病例表现为T细胞免疫表型，高达74%表现为LGL形态，通常呈惰性病程，据报道中位总生存时间(OST)为930天。

犬LGL淋巴瘤(LGLL)很少被描述；在被引用的13篇文献中，报道了23例LGLL。其中肝脾来源最常见(14只犬)，且最可能起源于脾红髓CD11d + tcr γδ限制性lgl。其他描述的原发部位包括外周淋巴结、骨骼肌、纵隔、皮肤、膀胱、小肠、脊髓、眼、心包、肾和脾。由于目前文献中临床表现和治疗方案不同，目前还不能确定犬LGLL的最佳治疗方法。然而，犬LGLL似乎是一种侵袭性淋巴瘤，只有1只犬在接受化疗后存活超过195天。由于这种淋巴瘤亚型的罕见性质，本研究的主要目的是评估迄今为止最大的犬LGLL病例队列，以更好地描述临床表现，细胞学特征，生物学行为和结果。次要目的是评估相关预后因素的临床病理资料。

 

2 材料和方法

2.1 病例选择 

根据细胞学或组织病理学确诊为LGLL的犬，我们对皇家兽医学院皇太后医院(Queen Mother Hospital for Animals，英国)2005年至2023年的医疗记录进行了审查。如前所述，大颗粒淋巴细胞被定义为中间型(细胞核1.5-2.0个红细胞[RBC]直径)到大型(细胞核＞2个红细胞直径)淋巴细胞，其中含有嗜天青的细胞质颗粒。如果肿瘤群体包含小淋巴细胞或如果只有外周血(PB)或骨髓(BM)受累，则排除犬。本研究获得了研究所伦理审查委员会的批准(URN SR2023-0070)。

 

2.2 临床数据 

临床资料包括年龄、性别、是否绝育、品种、体重、症状和体格检查结果。我们收集了诊断时的临床病理和诊断性影像学数据，以及随访数据（如有条件）。

根据主治医师的意见进行了全面分期，但这并非纳入试验的必要条件。由于回顾性数据分析的局限性、不完整的分期以及常见的多灶性器官或组织受累，我们没有根据世界卫生组织(WHO)分期系统为每个病例确定临床分期。如果有足够的信息，根据影像学和细胞学/组织病理学数据中肿瘤负荷的主要位置，回顾性分配每个病例的淋巴瘤原发解剖部位。如果有多灶性器官或组织受累，而肿瘤负荷的主要位置不明显，则淋巴瘤被归类为“弥散性”。在可能的情况下，记录有无外周血和/或骨髓浸润。根据WHO系统，所有病例均归为a或b级。

我们收集了有关治疗的数据，包括诱导和挽救化疗方案以及对治疗的反应。对于接受化疗的犬，外周淋巴结LGLL根据兽医肿瘤协作组(VCOG)外周淋巴结淋巴瘤疗效评价标准(v1.0)分类，外周淋巴结外实体瘤根据VCOG实体瘤疗效评价标准(cRECIST v1.0)分类。仅基于临床改善的反应被定义为“临床反应”。将犬归类为反应犬并不需要最低反应持续时间。

组织病理学报告(由委员会认证的病理学家撰写)经过审核，以获得包括形态特征、分级和IHC染色结果在内的信息。如前所述，低、中、高级别淋巴瘤的定义基于每40个目标的MIs为0-5、6-10和10。此外，还获得了抗原受体重排聚合酶链反应(PARR)和流式细胞术(FC)检测结果。

无进展间期(PFI)定义为从开始治疗到疾病进展的时间，生存时间(ST)定义为从诊断到死亡的时间。在提取数据时，每例病患被记录为存活、死亡或失访(LTFU)。在接受化疗的犬中，长期生存被定义为ST≥100天，因为这一时间点标志着Kaplan-Meier生存曲线右尾平台的开始，代表了大约20%的病例。

 

2.3 细胞学检查

在有条件的情况下，由委员会认证的临床病理学家(E.J.H)审核每个病例的改良瑞氏染色切片。记录了以下特征：(a)肿瘤淋巴细胞大小(中间型[细胞核1.5-2.0个红细胞直径]vs.大型[细胞核＞2个红细胞直径])，(b)细胞核形状(圆形，圆形凹陷，凹陷，凹陷-复合体，复合体)，(c)核仁(有vs.无)，(d)细胞质空泡(无，低，中，明显)，(e)颗粒大小(细，小，中或大，根据每个样本中记录的最大颗粒大小)，(f)每个细胞的颗粒数量(0 - 5,6 - 10,11 - 15，或根据每个样本中的最高计数16-20)，以及(g)有胞浆颗粒的肿瘤淋巴细胞百分比。

 

2.4 统计分析

频率和比例用于报告分类变量。采用Shapiro-Wilk检验评估计量资料的正态性，正态分布的计量资料用均值和标准差(SD)表示，非正态分布的计量资料用中位数和范围表示。Kaplan-Meier生存概率乘积用于评估群体和不同兴趣点队列的PFI和OST。单变量和多变量向后逐步Cox回归分析用于评估进展和生存的预测因素。在单变量分析中p≤.10有显著意义的变量被纳入多变量分析中，变量保持在p≤.05。结果以风险比(HR)及其95%置信区间(CI)表示。采用Fisher精确概率法、卡方检验和二元logistic回归分析化疗有效的可能性，以及接受化疗的犬是否长期存活。为进行统计学分析，根据外周淋巴结淋巴瘤的cRECIST v1.0或VCOG疗效评价标准，完全缓解(CR)或部分缓解(PR)的病患，以及表现为“临床缓解”的病患被归类为有效病患。结果以比值比(OR)及95%置信区间(95% CI)表示，且p≤.05被认为是显著的。在疗效、进展和生存分析中，评估的变量包括：年龄、WHO亚分期、个体血液学和生化异常、骨髓或外周血受累、原发解剖部位、存在肿瘤积液、如上所述的个体细胞学特征、化疗方案中包含左旋门冬酰胺酶、以洛莫司汀为基础的化疗方案的治疗、以洛莫司汀为基础的化疗方案中包含丙卡巴嗪以及对治疗的反应。在数据收集时存活的犬，LTFU，或在诊断时被安乐死的犬，从生存分析中删除。所有统计分析使用SPSS Statistics version 29.0 (IBM, Armonk, NY, USA)进行。

 

2.5 细胞系验证声明

由于本回顾性研究中未使用细胞系，因此未进行细胞系验证。

 

3 结果

3.1 病患特征

在医学数据库中初步鉴定出67只犬。2只犬因仅有PB受累而被排除，其中1只还表现出小-中等淋巴细胞大小。因此，最终纳入了65只犬。中位年龄8.9岁(1.3-14.8岁)，平均体重23.3 kg (SD, 11.0 kg)。雄性未去势10例(15.4%)，雄性去势23例(35.4%)，雌性未绝育3例(4.6%)，雌性绝育29例(44.6%)。共有28个品种，最常见的是拉布拉多猎犬(n = 19[29.2%])，混血犬(n = 5[7.7%])，边境牧羊犬(n = 4[6.2%])，金毛猎犬(n = 4[6.2%])和斯塔福德郡牛头㹴(n = 4[6.2%])。

发病前临床症状的中位持续时间为14天(范围0-72天)。临床表现以嗜睡(39例，60.0%)、食欲减退(36例，55.4%)、呕吐(22例，33.9%)、体重下降(18例，27.7%)、腹泻(16例，24.6%)、多尿(10例，15.4%)和多饮(10例，15.4%)最为常见。WHO b期61只(93.8%)，a期4只(6.2%)。

 

3.2 临床病理表现

62只犬进行了血液学检查，最常见的异常是贫血(n = 24[38.7%])，中性粒细胞增多(n = 24[38.7%])和单核细胞增多(n = 23[37.1%])。所有病例均行手工血涂片检查。16只犬(25.8%)检出循环肿瘤淋巴细胞。对63只犬进行了血清生化检查，最常见的异常是低白蛋白血症(n = 40[63.5%])、丙氨酸转氨酶升高(n = 37[58.7%])、高胆红素血症(n = 36[57.1%])和碱性磷酸酶升高(n = 35[55.6%])。测定了43只犬的离子钙，只有1只犬(2.3%)升高。22只犬检测了凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)，其中10只(45.5%)异常。临床病理异常的总结见表1。

 

3.3 诊断、分期和细胞学评估

65只犬初诊时均行诊断性影像学检查，其中40只(61.5%)行双腔影像学检查。58只犬(89.2%)可确定原发解剖部位。其中肝脾型19例(32.8%)，胃肠道型12例(20.7%)，弥散型12例(20.7%)，纵隔型5例(8.6%)，外周型2例(3.4%)，肺型2例(3.4%)，肝、肾、鼻、外周神经系统(双侧三叉神经)、中枢神经系统(CNS)以及心包部位各1例(1.7%)。17只犬(26.2%)发现肿瘤性积液并经细胞学证实；10只犬(15.4%)出现腹腔积液，5只犬(7.7%)出现胸腔积液，1只犬(1.5%)同时出现腹腔和胸腔积液，1只犬(1.5%)出现心包积液。20只(30.8%)犬出现骨髓受累(4只)或外周血受累(15只)，其中1只同时出现骨髓和外周血受累。

我们对64只犬进行了细胞学检查，对63只犬进行了LGLL诊断(图1)。2只犬的诊断是基于组织病理学。9只犬同时进行了细胞学和组织病理学检查。组织病理仅1例(9.1%)可见嗜天青颗粒。51例进行了细胞学检查，结果总结于表2。

8只犬可进行组织学分级；LGLL分级：低级别7例(87.5%)，中级别1例(12.5%)。5例行CD3、CD18、CD79a和磷钨酸-苏木精(PTAH)免疫组织化学染色。4例行聚合酶链反应(pcr)检测抗原受体重排，8例行FC检测。在通过IHC、PARR或FC确定免疫表型(n = 16[24.6%])的情况下，13只犬(81.3%)确认了T细胞免疫表型/克隆性T细胞受体γ链基因重排，3只犬(18.7%)确认了无细胞免疫表型。表3总结了免疫表型数据。

 

3.4 治疗和结果

22只犬在诊断为LGLL时被安乐死。43只犬接受治疗，其中32只接受最大剂量化疗(MTDC)， 11只仅接受泼尼松龙治疗。2只犬在药物治疗前接受手术治疗；一只患有弥散性LGLL的犬接受了患眼姑息性眼球摘除术，另一只患有空肠肿物的犬接受了肠切除术。从确诊到开始治疗的中位时间为2 d (0-28 d)。

在32只接受MTDC治疗的犬中，22只(68.8%)接受了基于洛莫司汀的治疗方案。其中洛莫司汀、长春新碱、丙卡巴嗪、泼尼松龙(LOPP)4例；左旋门冬酰胺酶LOPP4例；洛莫司汀、长春新碱、泼尼松龙(LOP)2例；左旋门冬酰胺酶LOP 3例；洛莫司汀、泼尼松龙(LP)2例；含左旋门冬酰胺酶的LP 2例；阿糖胞苷、长春新碱、洛莫司汀、泼尼松龙2例；左旋门冬酰胺酶、阿糖胞苷、洛莫司汀、泼尼松龙1例；阿糖胞苷、洛莫司汀、泼尼松龙1例；左旋门冬酰胺酶、洛莫司汀、多柔比星、泼尼松龙(1例)。不基于洛莫司汀的化疗方案包括：长春新碱、环磷酰胺、多柔比星、泼尼松龙(CHOP) 3例；阿糖胞苷、长春新碱2例；左旋门冬酰胺酶、长春新碱、环磷酰胺、泼尼松龙1例；左旋门冬酰胺酶、长春新碱、阿糖胞苷1例；左旋门冬酰胺酶、长春新碱1例；长春新碱1例；阿糖胞苷1例。

可在27只犬中评估治疗反应。20只(74.1%)对诱导化疗有反应，其中CR 1只(3.7%)，PR 5只(18.5%)，临床反应14只(51.9%)。1只犬(3.7%)病情稳定，6只犬(22.2%)病情发展。没有关于仅用泼尼松龙治疗的犬的治疗反应数据。

9只犬在疾病发展时接受了抢救方案。治疗方案：多柔比星、泼尼松龙2例；长春新碱、环磷酰胺、泼尼松龙1例；甲氨蝶呤、放线菌素d、阿糖胞苷、地塞米松1例；左旋门冬酰胺酶、阿糖胞苷、环磷酰胺、泼尼松龙1例；左旋门冬酰胺酶、洛莫司汀、阿糖胞苷、泼尼松龙1例；左旋门冬酰胺酶、阿霉素、环磷酰胺、泼尼松龙1例；马西替尼、多柔比星、洛莫司汀1例；苯丁酸氮芥、泼尼松龙1例。

6只犬对挽救化疗有反应。5只犬(83.3%)被证实有反应，其中2只(33.3%)为PR，3只(50.0%)为临床反应。1只(16.7%)犬出现疾病发展。

5只犬为LTFU，中位随访时间6 d (2- 48 d)。其余60只犬被证实死于与淋巴瘤相关的原因。37只犬PFI中位数为17 d (0-481 d)。所有犬的OST中位数为7 d (0-532 d)。

 

3.5预后因素

仅接受皮质类固醇治疗的犬(n = 11)和接受MTDC治疗的犬(n = 32)的PFI和OST中位数在数值上没有显著差异(PFI分别为10天[范围，0 - 481]和26天[范围，0 - 408][p = .353]；OST分别为7天[范围，4-532]和28天[范围，3-421][p = .585])。MTDC治疗犬6个月和1年生存率分别为9.4%和3.1%。

对化疗的反应与年龄、中性粒细胞减少症和血小板减少症显著相关。年龄较大的犬对治疗有反应的可能性较低(p = 0.035;Or = 0.43 [95% CI 0.20-0.94])。特别年龄≥7岁的犬(n = 19)与年龄< 7岁的犬(n = 13)相比，治疗反应的几率降低(p = .010;Or = 0.56 [95% CI 0.37-0.87])。与无中性粒细胞减少症的犬(n = 27)相比，诊断时有中性粒细胞减少症的犬(n = 3)反应的可能性也降低(p = 0.046;Or = 0.17 [95% CI 0.07-0.41])。诊断时有血小板减少症的犬(n = 7)与没有血小板减少症的犬(n = 23)相比，反应的可能性也降低(p = 0.028;Or = 0.05 [95% CI 0.00-0.69])。治疗有效的犬(n = 20)与治疗无效的犬(n = 7)相比，OST中位数有数值上但不显著的改善(分别为70天[范围13-532]vs. 6天[范围5-421][p = 0.099])。没有其他变量与对化疗产生反应相关。

在接受MTDC的犬(n = 32)中评估了疾病进展和生存的预后因素。表4显示了在单变量分析中与PFI和OST相关的因素(p≤.10)，因而用于多变量分析。在多变量分析中，单核细胞增多症(p = 0.009;HR 3.20 [95% CI 1.34-7.64])或外周血受累(p = .005;HR 5.23 [95% CI 1.67-16.37])显著缩短了PFIs。同样的变量与生存率相关；单核细胞增多的犬(p = 0.022;HR 2.71 [95% CI 1.15-6.38])或外周血受累(p = .004;HR 5.14 [95% CI 1.71-15.46])显著缩短了OST。无其他因素与PFI或OST相关。

在接受MTDC治疗的犬中，6只(18.8%)被评为长期存活犬(ST≥100 d)。长期生存病患的中位OST为198 d (101-421 d)。与长期生存显著相关的唯一变量是淋巴细胞大小。与中间细胞型LGLL犬相比，大细胞型LGLL犬长期存活的可能性显著降低(p = .021;Or 0.05 [95% CI 0.00-0.67])。

 

4 讨论

本研究首次描述了大样本LGLL犬的临床表现、细胞学特征、治疗结果和预后因素。与以往的病例报告或系列研究相似，本研究证实了犬LGLL的预后较差，接受MTDC治疗的犬的中位OST为28天，这与患有其他侵袭性淋巴瘤(如肾淋巴瘤)的犬相似，并且比患有中枢神经系统或消化系统淋巴瘤的犬短。在接受皮质类固醇和化疗的犬之间，以及对MTDC有反应和没有反应的犬之间，中位OST存在数值上的差异，但在统计学上不显著，但这些差异在更大的队列中可能达到显著性。

在我们的研究中，大多数(93.8%)犬在诊断时处于b期，反映了LGLL的侵袭性生物学行为，以结外形式和T细胞免疫表型为主。众所周知，与多中心B细胞淋巴瘤相比，患有多中心T细胞淋巴瘤或结外淋巴瘤的犬更容易出现临床不适。高钙血症常导致T细胞淋巴瘤患犬出现临床症状，但考虑到本研究中离子性高钙血症的发生率较低(2.3%)，这不大可能导致犬出现临床症状的比例较高。亚分期不具有预后意义，原因可能是临床表现良好的病例数量较少(6.2%)，因此统计学功效较低。

血液学异常是常见的：贫血，中性粒细胞增多，单核细胞增多和血小板减少是常见的，这些先前被认为与犬淋巴瘤的不良预后相关。在我们的研究中，在多变量分析中，单核细胞增多是PFI和OST较短的预后因素。目前尚不清楚单核细胞增多导致病患预后较差的原因。血液学检测到的一些单核细胞可能实际上是髓源性抑制细胞，包括未成熟的单核细胞和中性粒细胞，它们抑制T细胞和NK细胞介导的抗肿瘤免疫。单核细胞增多也可能是由于肿瘤产生的单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)增加，已知在淋巴瘤患犬中MCP-1增加。MCP-1可以募集肿瘤相关巨噬细胞，而巨噬细胞由于其促血管生成和免疫抑制作用，在许多人类癌症中与较差的预后相关。血小板减少症和中性粒细胞减少症与化疗有效的可能性降低相关。之前已经在多中心B细胞淋巴瘤患犬身上证明了这一点。虽然机制尚不清楚，但可能与骨髓受累、免疫失调和炎症生物标志物升高等因素有关。

本研究中的大多数犬(32.8%)有原发性肝脾LGLL，与之前的文献报道的60.9%的病例是肝脾起源相似。与人类相似，犬的肝脾淋巴瘤被认为起源于脾红髓内的细胞毒性γδ T细胞，其特征是CD11d +免疫表型，但在本研究中，没有对任何肝脾LGLL病例进行γδ或CD11d表达的评估。原发性胃肠道LGLL也常见(20.7%)。这是在LGLL患猫中遇到的最常见的形式，而γδ T细胞在上皮表面常见，因此胃肠道LGLL可能起源于这种特定的T细胞免疫表型。20只(30.8%)犬出现外周血或骨髓受累。这与之前报道的LGLL病例相似，其中34.8%的狗有外周血或骨髓受累，尽管在我们的研究和之前报道的病例中，并非所有的病患都进行了完全分期，因此外周血或骨髓受累的真实发生率可能更高。在多变量分析中，有外周血受累的犬有更短的PFI和OST。将这一发现与之前的文献进行比较具有挑战性，因为ⅴ期淋巴瘤在犬中的预后意义尚不明确，并且可能因淋巴瘤类型而异。虽然一些研究将Ⅴ期疾病与较差的生存率联系在一起，但其他研究发现分期和结果之间没有关系。与我们的研究相似，全身受累而非骨髓受累与猫LGLL的生存率显著相关。因此，与其他淋巴瘤类型相比，Ⅴ期疾病(尤其是外周血受累)在LGLL中可能具有更大的预后相关性，值得在未来的研究中进一步研究。

淋巴细胞大小与长期生存(≥100天)显著相关；与中间细胞型LGLL犬相比，大细胞型LGLL犬获得长期生存的可能性较低。虽然在生物学侵袭性淋巴瘤的细胞学背景下，中间细胞淋巴瘤和大细胞淋巴瘤通常被认为是一起的，但中间细胞淋巴瘤和大细胞淋巴瘤之间可能存在生物学行为和结果的差异，这在未来LGLL和非LGL淋巴瘤的研究中需要进一步研究。

8例LGLL中，7例(87.5%)具有中等-大细胞大小和侵袭性生物学行为，但根据WHO标准，LGLL的组织学分级为低级别。这与之前报道的LGLL病例相似。12例行组织病理学检查，其中10例(83.3%)为低级别，2例(16.7%)为高级别。尽管在组织学上表现为低级别肿瘤，犬LGLL遵循生物学上的高级别临床过程，预后较差。11例进行组织病理学检查的病例中只有1例可见嗜天青的细胞质颗粒，这突出了细胞学检查在诊断和认识LGLL临床意义中的重要性。

在免疫表型方面，T-LGL最常表达CD3、CD8和TCRα/β，偶尔也可表达CD4+/ CD8-或CD4-/CD8-伴有TCRγδ限制。自然杀伤LGLL的表面CD3、CD4和CD8通常为阴性，T-LGLL和NK-LGLL的颗粒酶B和M均为阳性。在进行免疫表型分型的16只犬中，81.3%的LGLL被证实为T细胞LGLL。行FC检查的5例病患中，4例CD4-/CD8-， 1例CD4+/CD8+。1只犬行CD11d检测，结果为阴性，未检测TCRγδ。根据CD3及其他淋巴细胞标志物的表达情况，3例为裸细胞。这些病例可能是NK-LGL起源，但由于PARR并不是用来排除T细胞抗原受体复合物表达完全缺失的T-LGL，因此这一点不能得到证实。在既往的兽医文献中，多数LGLL病例为CD4-/CD8-、CD11d+和γδ+，符合脾红髓起源，以肝脾LGLL居多；但CD4、CD8、CD11d等标志物的表达在病例间存在差异。因此，目前尚不清楚是否所有LGLL病例均起源于脾红髓，免疫表型可能取决于解剖形式。

诱导化疗有效率为74.1%。表现出临床改善的犬被纳入为反应者，因为许多犬在第一次计划的重新分期之前死亡或安乐死，并且考虑到系统的改善，它们可能对治疗有一些客观反应(PR或CR)。然而，由于这些病例的缓解情况未得到证实，因此真实缓解率可能被高估。除诊断时的中性粒细胞减少或血小板减少外，年龄≥7岁与较差的治疗反应相关，但原因不明。本研究无法对剂量强度进行综述，但在老年犬中选择较低的化疗剂量可能是为了避免不良反应风险的增加。然而，与人类文献相反，兽医研究没有发现淋巴瘤患者的剂量强度和结果之间有很强的相关性。最近的文献表明，与传统的CHOP方案相比，富含烷化的化疗方案治疗T细胞淋巴瘤可能改善预后。在我们的研究中，接受或不接受洛莫司汀诱导化疗的犬之间，治疗反应的可能性、PFI或OST没有差异，但这需要在更大的群体中进一步研究。

本研究的主要局限性与其回顾性性质有关。在一些病例中，从医疗记录中获得的数据不完整，治疗和监测方法没有标准化。并非所有病例均有完整的分期；大多数病例没有完整的免疫表型分型。由于样本量相对较小，统计分析的功效可能有限。鉴别淋巴瘤浸润到外周血和/或骨髓的犬与淋巴样白血病的犬可能具有挑战性，特别是缺乏一致的定义。然而，为了尽量减少在我们的研究中无意中纳入白血病病例(特别是LGL CLL)的风险，如果肿瘤淋巴细胞体积小或者如果仅累及外周血或骨髓，则排除了这些病例。

总之，这是迄今为止最大的评估犬LGLL的研究。这是一种与短中位PFI和OST相关的侵袭性淋巴瘤。在我们的研究中，年龄较大的犬以及有中性粒细胞减少症或血小板减少症的犬对化疗产生反应的可能性较小。单核细胞增多和外周血受累与较短的PFI和OST相关。淋巴细胞大小也被确定为与长期生存相关的因素。未来的研究应该集中在进一步确定犬LGLL的免疫表型，并证实本研究中确定的预后因素。犬LGLL的最佳治疗方法目前尚不清楚。

 

 

图1大颗粒细胞淋巴瘤病例的细胞形态学，改良瑞氏染色，100×物镜 (A)中间型淋巴细胞，细胞核圆形，直径约1.5个红细胞，染色质呈团块状，核仁不明显，胞质中量淡蓝色，常含有中量品红细颗粒。(B)中间型淋巴细胞，细胞核圆形，直径约1.5个红细胞，染色质细点状，核仁不明显，胞质少量深蓝色，细胞数量少，含有中等数量的品红小颗粒。(C)大淋巴细胞，细胞核圆形或凹陷，直径约2-2.5个红细胞，染色质粗点状，核仁1-2个，胞质中蓝色，细胞数量少，含有少量的品红小颗粒。(D)大淋巴细胞，核圆形至凹陷，直径约2个红细胞，染色质细点状，核仁不明显，胞质少量深蓝色，偶有细胞含有中等数量的品红小颗粒。常可见核分裂象。RBC，红细胞。

 

 

异常	犬只数	占比（％）
血液学 (n = 62)
贫血	24	38.7
中性粒细胞增多症	24	38.7
单核细胞增多症	23	37.1
淋巴细胞减少症	21	33.9
血小板减少症	17	27.4
循环肿瘤淋巴细胞	16	25.8
中性粒细胞减少症	8	12.9
生物化学 (n = 63)
低白蛋白血症	40	63.5
ALT升高	37	58.7
高胆红素血症	36	57.1
ALP升高	35	55.6
总钙降低	26	41.3
低球蛋白血症	21	33.3
低胆固醇血症	17	27.0
高磷酸血症	13	20.6
淀粉酶升高	13	20.6
肌酸激酶升高	13	20.6
高乳酸血症	13	20.6
尿素氮升高	13	20.6
低血糖	12	19.1
C反应蛋白升高	11	17.5
高氯血症	7	11.1
高胆固醇血症	7	11.1
凝血 (n = 22)
PT和APTT延长	4	18.2
仅PT延长	3	13.6
仅APTT延长	3	13.6

表1大颗粒细胞淋巴瘤患犬诊断时常见的血液学、生化和凝血异常。

缩略词：ALP，碱性磷酸酶；ALT，谷丙转氨酶。

 

分类参数		犬只数	占比（％）
淋巴细胞大小	中间	19	37.3
	大	32	62.7
核形态	圆形-锯齿状	34	66.7
	圆形	11	21.6
	锯齿状	4	7.8
	锯齿状-复合形状	2	3.9
核仁	存在	16	31.4
	无	35	68.6
胞质空泡	无	3	5.9
	少	8	15.7
	中度	32	62.7
	明显	8	15.7
粒度大小	正常	1	2.0
	小	36	70.6
	中等	13	25.4
	大	1	2.0
每细胞颗粒数	0-5	11	21.6
	6-10	24	47.0
	11-15	8	15.7
	16-20	8	15.7
连续参数		中位数	范围
颗粒状肿瘤淋巴细胞/例(%)		20	1-95

表2 51例犬大颗粒细胞淋巴瘤细胞学特征。

缩略词：HPF，高倍镜视野。

 

病例	解剖形态	免疫表型	PARR	免疫组织化学	流式细胞术
1	肝脾	T细胞	克隆TCR基因重排	–	–
2	肝脾	T细胞	克隆TCR基因重排	–	–
3	肝脾	T细胞	克隆TCR基因重排	–	–
4	弥散性	T细胞	克隆TCR基因重排	–	–
5	无法确定	T细胞	克隆TCR基因重排	–	–
6	弥散性	T细胞	–	CD3+	–
7	胃肠道	T细胞	–	CD3+,CD79a-	–
8	胃肠道	T细胞	–	CD3+	–
9	纵膈	T细胞	–	–	CD3+,CD45+,CD4-,CD5-,CD8-, CD21-,CD79a-,CD34-,MHC-II-
10	纵膈	T细胞	–	–	CD3+,CD45+,CD4-,CD5-,CD8-, CD21-,CD79a-,CD34-,MHC-II-
11	无法确定	T细胞	–	–	CD3+,CD4+,CD5+,CD8+,CD45+,MHC- II+,CD21-,CD79a-
12	纵膈	T细胞	–	–	CD3+,CD45+,CD4-,CD5-,CD8-,CD21-,CD79a-, CD34-,CD11d-
13	弥散性	T细胞	–	–	CD3+,CD45+,MHC-II+,CD4-,CD5-, CD8-,CD21-,CD79a-,CD34-
14	肾	裸细胞	–	CD3-,CD79a-,CD18-	CD3-,CD21-
15	胃肠道	裸细胞	–	–	CD45+,CD3-,CD4-,CD5-,CD8-, CD21-,CD79a-,CD34-,CD11d-
16	弥散性	裸细胞	–	–	CD45+,CD34+(弱),CD3-,CD4-,CD5-,CD8-,CD21-,CD79a-,MHC-II-,CD14-,MPO-,MAC387-

表3 16只犬大颗粒细胞淋巴瘤免疫表型数据。

缩略词：IHC,免疫组织化学；MPO，髓过氧化物酶；PARR，抗原受体重排聚合酶链反应；TCR, T细胞受体；-，未进行。

 

进展
指标（犬只数）		PFI (天)	p值	HR (95% CI)
血小板减少症	否(n = 23)	47	0.028	2.74(1.11-6.73)
	是(n = 7)	5
单核细胞增多症	否(n = 18)	48	0.033	2.41(1.07-5.41)
	是(n = 12)	17
外周血受累	否(n = 24)	47	0.022	3.35(1.29-9.45)
	是(n = 6)	3
对治疗反应	否(n = 7)	3	0.09	0.43(0.18-1.13)
	是(n = 20)	49
存活
指标（犬只数）		OST(天)	p值	HR (95% CI)
血小板减少症	否(n = 23)	61	0.035	2.60(1.07-6.31)
	是(n = 7)	7
单核细胞增多症	否(n = 18)	61	0.071	2.10(0.94-4.71)
	是(n = 12)	38
外周血受累	否(n = 24)	61	0.014	3.63(1.30-10.10)
	是(n = 6)	7
淋巴细胞大小	中间(n = 7)	101	0.088	2.23(0.89-5.62)
	大(n = 16)	38
对治疗反应	否(n = 7)	6	0.099	0.46(0.19-1.16)
	是(n = 20)	70

表4单变量Cox回归分析结果(p≤.10)纳入多变量分析的大颗粒细胞淋巴瘤患犬接受最大耐受剂量化疗的进展和生存预后因素。

缩略词：CI，置信区间；HPF，高倍镜视野；HR，风险比；OST，总生存时间(中位数)；PFI，无进展间期(中位数)。

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